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Sph I是经过基因工程重组的快速限制性内切酶，适用于质粒DNA、PCR产物或基因组DNA等的快速酶切。

本制品含通用的Buffer和Color Buffer，其中Color Buffer含红色和黄色示踪染料，酶切产物可直接用于凝胶电泳。Color Buffer的红色染料与2500bp双链DNA片段在1%琼脂糖凝胶中迁移速率接近；黄色染料与10bp双链DNA片段在1%琼脂糖凝胶中迁移速率接近。

• Sph I的同裂酶有：Pae I。
  
• 不同DNA中的Sph I酶切位点数量：
  

  λDNA	ΦX174	pBR322	pUC57	pUC18/19	SV40	M13mp18/19	Adeno2
  6	0	1	1	1	2	1	8

• DNA甲基化修饰对Sph I酶切影响：
  

  Dam	Dcm	CpG	EcoKI	EcoBI
  无影响	无影响	无影响	无影响	剪切受影响

• 若进行双酶切或多酶切，每种快速内切酶的用量为1μL，且所有内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10。可根据需要适当扩大反应体系。
  
• 若同时使用的几种快速内切酶的最适反应温度不同，则应先以最适温度低的酶开始酶切，再添加最适温度较高的酶，并在其最适反应温度下进行酶切。
  
• 本制品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• DNA快速酶切流程
  
  • 在冰上按下表配制反应体系：
    

    成分	质粒DNA	PCR产物	基因组DNA
    ddH2O	15μL	16μL	30μL
    10×Buffer	2μL	3μL	5μL
    底物DNA	2μL(≤1μg)	10μL(~0.2μg)	10μL(5μg)
    Sph I	1μL	1μL	5μL
    总体积	20μL	30μL	50μL

    • 若底物DNA为PCR产物，建议使用经纯化的PCR产物。若使用未经纯化的PCR产物，可将10×Buffer或10×Color Buffer减少至2μL。
  • 轻轻吸打或轻弹管壁混匀反应液。切勿涡旋。瞬时离心收集挂壁液滴。
    
  • 对于质粒DNA，37℃孵育15min；对于PCR产物，37℃孵育15～30min；对于基因组DNA，37℃孵育30～60min。
    
  • 可选步骤：80℃孵育20min可使酶失活，停止反应。
    
  • 若使用10×Color Buffer，酶切产物可以直接进行上样电泳。
• 适用于质粒DNA的扩大反应体系
  

  DNA	1μg	2μg	3μg	4μg	5μg
  Sph I	1μL	2μL	3μL	4μL	5μL
  10×Buffer	2μL	2μL	3μL	4μL	5μL
  总体积	20μL	20μL	30μL	40μL	50μL

  • 若总反应体系大于20μL，可适当增加孵育时间，尽量使用水浴、金属浴或沙浴。